- AAV (Adeno-associated virus)는 유전자 치료제 개발에 가장 널리 사용되는 유전자 전달 플랫폼 중 하나입니다.
- 그러나 제조 과정의 불일치와 치료 효과의 변동성으로 인해 임상적 성공에 한계가 있습니다.
- 주요 원인 중 하나는 바이러스 게놈 패키징 및 도입 유전자 발현에 중요한 역할을 하는 AAV 벡터의 ITR (inverted terminal repeat) 영역의 불안정성입니다.
- MuteFree™ AAV 백본은 매우 안정적인 ITR을 가진 AAV transfer vector의 생성을 가능하게 설계, 최적화 및 검증되었으며, 벡터 내 돌연변이 발생을 방지합니다.
- 유전자 치료제의 안정성 (stability)을 극대화하여 일관되고 높은 수율의 생산이 가능합니다.
AAV 백본의 ITR stability 이슈
- ITR은 AAV 패키징 및 도입 유전자 발현에 중요한 역할을 합니다.
- GC 함량이 높은 영역은 매우 불안정하고 돌연변이가 발생하기 쉬워, 이질성 (heterogeneity) 증가, 바이러스 역가 감소, 도입 유전자 발현 저하를 초래할 수 있습니다.
- 임상 개발 과정에서 이는 제조를 복잡하게 만들 수 있으며, 원하는 치료 효과를 얻기 위해 더 높은 투여량이 필요할 수 있습니다.
- 특화된 E. coli 균주, 배양 조건 변경, 변형된 ITR 서열을 포함하여 다양한 해결 방법이 제시되었으나 plasmid 및 AAV 수율을 저하시킬 수 있습니다.
Figure 1. 초기 제한효소 처리 QC 검증을 통과한 연구 및 산업 파트너로부터 수집된 300개 이상의 벡터의 ITR에 대해서 Sanger 시퀀싱을 수행. 시퀀싱 결과, AAV transfer vector ITR의 약 40%에서 이전에 발견되지 않았던 돌연변이가 확인 (Nucleic Acids Res. 2025. doi: 10.1093/nar/gkaf697).
ITR stability향상을 위한 혁신적인 솔루션
- VectorBuilder는 ITR 안정성을 보호하는 새로운 AAV transfer vector인 MuteFree™ AAV를 개발했습니다.
- 최적화된 벡터 백본은 바이러스 벡터에 ITR 변이가 없도록 보장하여, 유전자 치료제의 정체성 (identity), 효능 (efficacy) 및 안전성 (safety)에 대한 신뢰를 증가시킵니다.
- VectorBuilder의 혁신가 팀이 세심하게 개선하고 검증한 MuteFree™는 유전자 치료제 제품이 요구하는 일관성을 제공합니다.
Figure 2. MuteFree™ AAV로 전환하면 E. coli에서 10회 연속 계대 배양 (>160 population doublings) 후 ITR 돌연변이율이 single-stranded AAV(ssAAV)의 경우 48.1%에서 0%로, self-complementary AAV (scAAV)의 경우 31.8%에서 0%로 감소. ITR 무결성 (integrity )은 Sanger 시퀀싱으로 분석.
기존 파이프라인에 완벽하게 통합 가능
-VectorBuilder의 최적화된 MuteFree™ AAV 백본은 기존 제조 워크플로우에 쉽게 통합되어 세포 및 유전자 치료제를 위한 고역가, 고품질 AAV 벡터를 일관되게 생산할 수 있도록 지원합니다.
Figure 3. 기존 transfer vector 백본과 비교하여 MuteFree™ AAV를 채택한 결과, (A) 바이러스 역가 및 full capsid 비율, (B) silver-stained SDS-PAGE에 의해 보여지는 순도, (C) AAV-EGFP를 HEK293 세포에 transduction한 후 48시간 후에 측정한 transduction 효율이 유지.
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*제품문의 T. 031-728-3239, E. dawinbio@dawinbio.com
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- AAV (Adeno-associated virus)는 유전자 치료제 개발에 가장 널리 사용되는 유전자 전달 플랫폼 중 하나입니다.
- 그러나 제조 과정의 불일치와 치료 효과의 변동성으로 인해 임상적 성공에 한계가 있습니다.
- 주요 원인 중 하나는 바이러스 게놈 패키징 및 도입 유전자 발현에 중요한 역할을 하는 AAV 벡터의 ITR (inverted terminal repeat) 영역의 불안정성입니다.
- MuteFree™ AAV 백본은 매우 안정적인 ITR을 가진 AAV transfer vector의 생성을 가능하게 설계, 최적화 및 검증되었으며, 벡터 내 돌연변이 발생을 방지합니다.
- 유전자 치료제의 안정성 (stability)을 극대화하여 일관되고 높은 수율의 생산이 가능합니다.
AAV 백본의 ITR stability 이슈
- ITR은 AAV 패키징 및 도입 유전자 발현에 중요한 역할을 합니다.
- GC 함량이 높은 영역은 매우 불안정하고 돌연변이가 발생하기 쉬워, 이질성 (heterogeneity) 증가, 바이러스 역가 감소, 도입 유전자 발현 저하를 초래할 수 있습니다.
- 임상 개발 과정에서 이는 제조를 복잡하게 만들 수 있으며, 원하는 치료 효과를 얻기 위해 더 높은 투여량이 필요할 수 있습니다.
- 특화된 E. coli 균주, 배양 조건 변경, 변형된 ITR 서열을 포함하여 다양한 해결 방법이 제시되었으나 plasmid 및 AAV 수율을 저하시킬 수 있습니다.
Figure 1. 초기 제한효소 처리 QC 검증을 통과한 연구 및 산업 파트너로부터 수집된 300개 이상의 벡터의 ITR에 대해서 Sanger 시퀀싱을 수행. 시퀀싱 결과, AAV transfer vector ITR의 약 40%에서 이전에 발견되지 않았던 돌연변이가 확인 (Nucleic Acids Res. 2025. doi: 10.1093/nar/gkaf697).
ITR stability향상을 위한 혁신적인 솔루션
- VectorBuilder는 ITR 안정성을 보호하는 새로운 AAV transfer vector인 MuteFree™ AAV를 개발했습니다.
- 최적화된 벡터 백본은 바이러스 벡터에 ITR 변이가 없도록 보장하여, 유전자 치료제의 정체성 (identity), 효능 (efficacy) 및 안전성 (safety)에 대한 신뢰를 증가시킵니다.
- VectorBuilder의 혁신가 팀이 세심하게 개선하고 검증한 MuteFree™는 유전자 치료제 제품이 요구하는 일관성을 제공합니다.
Figure 2. MuteFree™ AAV로 전환하면 E. coli에서 10회 연속 계대 배양 (>160 population doublings) 후 ITR 돌연변이율이 single-stranded AAV(ssAAV)의 경우 48.1%에서 0%로, self-complementary AAV (scAAV)의 경우 31.8%에서 0%로 감소. ITR 무결성 (integrity )은 Sanger 시퀀싱으로 분석.
기존 파이프라인에 완벽하게 통합 가능
-VectorBuilder의 최적화된 MuteFree™ AAV 백본은 기존 제조 워크플로우에 쉽게 통합되어 세포 및 유전자 치료제를 위한 고역가, 고품질 AAV 벡터를 일관되게 생산할 수 있도록 지원합니다.
Figure 3. 기존 transfer vector 백본과 비교하여 MuteFree™ AAV를 채택한 결과, (A) 바이러스 역가 및 full capsid 비율, (B) silver-stained SDS-PAGE에 의해 보여지는 순도, (C) AAV-EGFP를 HEK293 세포에 transduction한 후 48시간 후에 측정한 transduction 효율이 유지.
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*제품문의 T. 031-728-3239, E. dawinbio@dawinbio.com
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