Reporter Cell LinesAnti-PD-1/PD-L1 Cell-based Assay

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PD-1/PD-L1 Bio-IC™
면역 체크포인트 (immune checkpoint) 억제제 스크리닝을 위한
Anti-immune checkpoint cell-based assay


InvivoGen은 PD-1/PD-L1 immune checkpoint의 항체, Fc-fusion protein 또는 small molecule-based 억제제를 스크리닝하기 위하여 primary human T cell을 대신하여 특별히 설계된 세포 기반 분석을 제공합니다.

해당 assay는 reporter T cell line과 antigen-presenting cell line (APC)로 구성되어 있습니다. T 세포는 특정 T cell receptor (TCR)를 발현하는 human Jurkat reporter T cell line에서 유래하였으며, APC는 [HLA::peptide] complex를 발현하는 human Raji cell line로 부터 유래되었습니다.

  ※ Jurkat-Lucia™ TCR-hPD-1 Cells – Reporter T Cells 
  ※ Raji-APC-hPD-L1 Cells – Antigen-Presenting Cells (APC)


한 쌍으로 이루어진 두 세포는 T-cell activation signals을 전달하는 세포 표면 분자의 상호작용을 통해 T 세포와 APC 사이의 immune synapse를 모방할 수 있습니다.
첫 번째 신호는 (signal 1) Jurkat-Lucia™ 세포의 TCR에 의해 Raji-APC 세포의 HLA molecules ([HLA::peptide])과 complex된 특정 antigenic peptide를 인식하며 시작됩니다. Co-stimulation signal 이라고 불리는 두 번째 신호는 (signal 2) APC와 T 세포의 표면의 CD80/86 및 CD28 분자의 상호 작용에 의해 작동됩니다. 추가 조절 신호 (IC signal)는 T 세포의 PD-1, APC의 PD-L1 결합 시 T 세포 활성화를 억제합니다.

Jurkat-Lucia™ TCR-hPD-1 및 Raji-APC-hPD-L1 세포의 co-culture를 통하여 IC signal (signal 1+ signal 2) 및 Jurkat-Lucia™ TCR-hPD-1에서 subsequent NFAT 활성화를 억제합니다. Lucia luciferase reporter는 발현되지 않습니다.

Anti-PD-1 혹은 Anti-PD-L1을 첨가하여 co-culture 시 IC signal은 전달되지 않으며, signal 1 + signal 2는 Jurkat-Lucia™ TCR-hPD-1에서 NFAT 활성을 유도하고 Lucia luciferase reporter를 발현합니다.


T 세포 주요 기능

  • Stable specific [HLA::peptide]-restricted TCR
  • Stable hCD28 overexpression
  • Stable hPD-1 overexpression
  • NFAT-inducible Lucia luciferase reporter activity

Antigen-Presenting Cells  (APC) 주요 기능

  • Stable specific [HLA::peptide] expression
  • Endogenous hCD80/86 expression
  • Stable hPD-L1 overexpression


Figures

Figure 1: Validation of human CD28 and PD-1 expression by Jurkat-Lucia™ TCR-hPD-1 cells. Jurkat-Lucia™ NFAT and JurkatLucia™ TCR-hPD-1 cells were incubated with a PE-conjugated AntihCD28 (A) or APC-conjugated Anti-hPD-1 (B) mAb for 30 minutes. The binding affinity was then measured using flow cytometry



Figure 2: Activation of Jurkat-Lucia™ TCR-hPD-1 cells. Raji-APC-hPD-L1 and Jurkat-Lucia™ TCR-hPD-1 cells were incubated with gradient concentrations of AntihPD-1 hIgG1 or Anti-hPD-L1 mAbs for 6 hours. NFAT activation, reflecting the disruption of PD-1/PD-L1 inhibitory interaction, was assessed by determining Lucia luciferase activity in the supernatant using QUANTI-Luc™. The fold increase over non induced cells (no mAbs) is shown.


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