RT-PCR편차 없는 cDNA 합성, amfiRivert cDNA Synthesis Platinum Master Mix와 함께하세요!

2018-01-15
조회수 39724

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amfiRivert cDNA Synthesis Platinum master Mix으로 편차 없는 cDNA 합성하세요!!!




Up to 17.8 Kb

Modified M-MLV RTase : 기존 M-MLV 대비 높은 활성 온도 (40-60℃) 를 가지며  RNase 활성이 낮아 긴 길이의 cDNA를 합성할 수 있음 (최대 17.8 Kb)


두 가지 vial로 구성 (편리하게 사용가능)

- Enzyme Mix: amfiRivert Reverse Transcriptase와 RNase Inhibitor Plus

- 2X Buffer Mix: Oigo dT(18)와 random hexamer가 최적의 비율로 혼합되어 있어서 편차 없이 cDNA 합성이 가능하며, cDNA 합성에 필요한 요소 (MgCl2, dNTP mixture) 가 모두 최적의 농도로 포함되어 추가적인 optimization이 필요 없음 


Wide range of RNA

 실험에 따라 RNA input을 유동적으로 조절 가능 

 (Total RNA: 10 pg ~5 ug, mRNA: 10 pg ~ 500 ng)



 실험 데이터

1. cDNA Synthesis up to 17.8 Kb

     

0.8 μg의 total human heart muscle RNA를 amfiRivert cDNA Synthesis Platinum Master Mix를 이용하여 

cDNA로 변환한 다음, 4 μl의 cDNA를 amfiSure Taq DNA polymerase를 이용하여 증폭한 결과


2.  Fully Active at 40~60℃

     






0.8 μg의 total human heart muscle RNA를 각각 다른 온도 (40~60℃)에서 amfiRivert cDNA Synthesis Platinum Master Mix를 이용하여 cDNA로 변환한 다음, 4 μl의 cDNA를 amfiSure PCR Master Mix를 이용하여 증폭한 결과


3. amfiRivert의 optimized primer mix

         












Hela cell로부터 100ng의 total RNA를 추출한 다음, random hexamer, oligo dT(18), amfiRivert의 optimized primer mix를 각각 이용하여 cDNA 합성 후, GUSB (β-glucuronidase) 유전자의 5'end(red)와 3'end (green)를 real-time PCR로 증폭한 결과
- 동일한 샘플에서 Random hexamer 또는 oligo dT(18) primera만을 사용하여 실험한 결과, 같은 유전자 안에서도 sequence에 따라 유전자의 Ct value가 다르게 발현.
- amfiRivert mix를 이용했을 때는 증폭 위치가 다르더라도 유사한 Ct value를 확인



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amfiRivert cDNA Synthesis Platinum Master Mix
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Reference

  • Inhibition of protein arginine deiminase II suppresses retinoblastoma in orthotopic transplantation in mice. 2023, Oncology reports

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