Antibody storage guide
Antibody 의 오염과 손상을 막기 위한 보관 방법
올바르게 보관된 제품은 활성이 수개월간 유지될 수 있습니다. 때문에 항상 제품의 datasheet에 명시되어 있는 보관 안내를 확인하실 것을 권장 드리며, 잘 못 보관 된 제품의 경우, 결과에 대해 guarantee 할 수 없습니다.
Storage temperatures
abcam의 많은 제품들은 적은 용량으로 aliquot 하여 -20°C 혹은 -80°C 보관이 최적화된 조건입니다. Aliquot 은 얼렸다 녹이는 과정에서의 antibody손상을 최소화 하고, 반복된 pipetting 으로 인한 오염 가능성은 최소화 시켜줄 수 있습니다. Aliquot 은 한번만 얼렸다 녹여서 사용할 수 있도록 하고, 나머지는 4°C 보관을 권장합니다.
제품을 받자마자 10,000 x g 로 20초간 centrifuge를 하여 vial에 묻어있는 solution은 모으고, low-protein-binding 튜브로 aliguot 하여 보관합니다. Aliquot 하는 용량은 한번에 사용하는 양에 따라 다르며, 증발이나 튜브 표면에 흡수를 방지하기 위하여 10ul 이하 용량은 피하도록 합니다.
대부분의 경우, 항체는 1~2주간 4°C 보관이 가능하며, datasheet의 정보를 확인하는 것이 중요합니다.
Exceptions
Enzyme-conjugated antibody의 경우에는 절대 냉동 보관 하지 않으며 4°C에서 보관하도록 합니다. 얼렸다 녹이는 과정이 효소 활성을 감소시키고, antibody의 결합력도 감소시킵니다.
형광, 효소, biotin 등이 결합된 항체의 경우, dark vial 혹은 호일로 빛을 차단한 vial에 보관을 해야합니다. 빛에 노출이 되면 conjugate의 활성에 영향이 있고, 특정 형광의 경우에는 photo-bleaching 현상 대문에 실험 전 단계에 빛을 피해야 하는 경우도 있습니다.
IgG3 isotype은 녹는 과정에서 독특한 뭉침 경향을 보이기 때문에, 항상 4°C 보관을 해야하며, Ascites 는 protease를 포함하고 있을 수 있기 때문에 받자마자 냉동 보관을 해야합니다.
Contamination
미생물 오염을 방지하기 위해서 sodium azide를 최종 농도의 0.02% (w/v)로 첨가할 수 있습니다. Abcam의 많은 항체들은 이러한 보존제가 0.02~0.05% 농도로 포함되어 있습니다. 자세한 정보는 datasheet 에서 확인하실 수 있습니다.
When not to use sodium azide
Antibody로 살아있는 세포를 염색하거나 treat, 혹은 in vivo 연구에 활용할 때에는 sodium azide를 포함하지 않는 사용해야 합니다. 이러한 antimicrobial agent는 toxic 할 수 있고, cytochrome electron transport system을 차단하는 역할을 합니다.
또한 Sodium azide는 amine group이 포함된 conjugation 반응을 방해하기 때문에, 해당 실험 과정에서 반드시 제거해야 합니다. Conjugation반응 후에는 항체를 sodium azide에 보관할 수 있습니다. 예외적으로 HRP-conjugation이 된 항체의 경우에는 azide가 HRP를 억제하기 때문에 sodium azide가 없는 buffer에 보관을 해야 합니다. 대체하여 사용할 수 있는 조건은 primary amine이 없는 0.01% thimerosal (merthiolate)입니다.
Sodium aizde는 dialysis 혹은 gel filtration으로 antibody solution 에서 제거할 수 있습니다. IgG의 molecular weight 는 150,000 daltons (IgM is ~600,000)이고, sodium azide 는 65 daltons 입니다. 14,000 daltons cut off 조건의 micro-dialysis unit을 이용하여 antibody는 남기고 azide는 방출시킴으로써 분리할 수 있습니다.
protocol : In a beaker on a magnetic stirrer kept at 4°C, use at least a liter of cold PBS per mL of antibody and stir the dialysis unit for 6 hrs. Change the PBS twice, stirring at least 6 h for each change. If possible, all materials should be sterilized and the resulting preparation should be handled aseptically.
Freeze/thaw damage
Antibody를 반복적으로 freeze/thaw 하게 되면, 변성이 일어날 수 있고 binding 능력이 감소하게 됩니다.
-20°C 보관은 대부분의 항체에 적합하고, -80°C 보관의 경우 큰 장점은 없습니다. 냉동고가 성애 방지를 위해 freezing/thawing을 반복하는 기능이 있다면, 이러한 냉동고는 피해야 합니다. 또한 antibody는 냉동고에서도 온도 변화가 가장 적은 위치에 보관하는 것이 좋습니다.
일부 연구자들은 최종 농도의 50%로 cryoprotectant glycerol을 첨가하기도 하며, 이것은 어는 온도를 -20°C 이하로 낮게 하여 많은 항체들에 적용되기도 합니다. abcam의 경우, 소수의 제품만 이러한 조건에서 제품의 안정성이 테스트 되었기 때문에, datasheet 상의 안내대로 보관할 것을 추천하며 guarantee 하고 있습니다. Storage solution에 glycerol이 포함된 경우에도 -80°C 보관을 하게 되면 glycerol 도 얼기 때문에, 추천하지 않습니다. Glycerol은 박테리아 감염 가능성이 있다는 점을 유의하여, glycerol과 같은 cryoprotectant를 첨가할 경우에는 멸균된 조건에서 취급하도록 해야 합니다.
Protein concentration and stability
Antibody를 working concentration으로 희석하고 4°C에 하루이상 보관하는 것은 피해야 합니다. 단백질은 1mg/ml 혹은 그 이상의 고농도로 보관될 때에 degradation이 덜 일어납니다. 이러한 이유로 BSA를 안정제로 사용하기도 합니다. Conjugation 하고자 하는 항체에는 안정화 단백질을 첨가하지 않습니다. 이 단백질이 항체와 경쟁하면서 conjugation 효율을 감소시킬 수 있기 때문입니다
* 출처 : abcam 홈페이지
*학술 문의 : Tel. 031-728-3234, 3237 E-mail. technical@dawinbio.com 카카오톡 플러스친구 ID: abcam
#Abcam#다윈바이오#Antibody#Antibody storage
Antibody 의 오염과 손상을 막기 위한 보관 방법
올바르게 보관된 제품은 활성이 수개월간 유지될 수 있습니다. 때문에 항상 제품의 datasheet에 명시되어 있는 보관 안내를 확인하실 것을 권장 드리며, 잘 못 보관 된 제품의 경우, 결과에 대해 guarantee 할 수 없습니다.
Storage temperatures
abcam의 많은 제품들은 적은 용량으로 aliquot 하여 -20°C 혹은 -80°C 보관이 최적화된 조건입니다. Aliquot 은 얼렸다 녹이는 과정에서의 antibody손상을 최소화 하고, 반복된 pipetting 으로 인한 오염 가능성은 최소화 시켜줄 수 있습니다. Aliquot 은 한번만 얼렸다 녹여서 사용할 수 있도록 하고, 나머지는 4°C 보관을 권장합니다.
제품을 받자마자 10,000 x g 로 20초간 centrifuge를 하여 vial에 묻어있는 solution은 모으고, low-protein-binding 튜브로 aliguot 하여 보관합니다. Aliquot 하는 용량은 한번에 사용하는 양에 따라 다르며, 증발이나 튜브 표면에 흡수를 방지하기 위하여 10ul 이하 용량은 피하도록 합니다.
대부분의 경우, 항체는 1~2주간 4°C 보관이 가능하며, datasheet의 정보를 확인하는 것이 중요합니다.
Exceptions
Enzyme-conjugated antibody의 경우에는 절대 냉동 보관 하지 않으며 4°C에서 보관하도록 합니다. 얼렸다 녹이는 과정이 효소 활성을 감소시키고, antibody의 결합력도 감소시킵니다.
형광, 효소, biotin 등이 결합된 항체의 경우, dark vial 혹은 호일로 빛을 차단한 vial에 보관을 해야합니다. 빛에 노출이 되면 conjugate의 활성에 영향이 있고, 특정 형광의 경우에는 photo-bleaching 현상 대문에 실험 전 단계에 빛을 피해야 하는 경우도 있습니다.
IgG3 isotype은 녹는 과정에서 독특한 뭉침 경향을 보이기 때문에, 항상 4°C 보관을 해야하며, Ascites 는 protease를 포함하고 있을 수 있기 때문에 받자마자 냉동 보관을 해야합니다.
Contamination
미생물 오염을 방지하기 위해서 sodium azide를 최종 농도의 0.02% (w/v)로 첨가할 수 있습니다. Abcam의 많은 항체들은 이러한 보존제가 0.02~0.05% 농도로 포함되어 있습니다. 자세한 정보는 datasheet 에서 확인하실 수 있습니다.
When not to use sodium azide
Antibody로 살아있는 세포를 염색하거나 treat, 혹은 in vivo 연구에 활용할 때에는 sodium azide를 포함하지 않는 사용해야 합니다. 이러한 antimicrobial agent는 toxic 할 수 있고, cytochrome electron transport system을 차단하는 역할을 합니다.
또한 Sodium azide는 amine group이 포함된 conjugation 반응을 방해하기 때문에, 해당 실험 과정에서 반드시 제거해야 합니다. Conjugation반응 후에는 항체를 sodium azide에 보관할 수 있습니다. 예외적으로 HRP-conjugation이 된 항체의 경우에는 azide가 HRP를 억제하기 때문에 sodium azide가 없는 buffer에 보관을 해야 합니다. 대체하여 사용할 수 있는 조건은 primary amine이 없는 0.01% thimerosal (merthiolate)입니다.
Sodium aizde는 dialysis 혹은 gel filtration으로 antibody solution 에서 제거할 수 있습니다. IgG의 molecular weight 는 150,000 daltons (IgM is ~600,000)이고, sodium azide 는 65 daltons 입니다. 14,000 daltons cut off 조건의 micro-dialysis unit을 이용하여 antibody는 남기고 azide는 방출시킴으로써 분리할 수 있습니다.
protocol : In a beaker on a magnetic stirrer kept at 4°C, use at least a liter of cold PBS per mL of antibody and stir the dialysis unit for 6 hrs. Change the PBS twice, stirring at least 6 h for each change. If possible, all materials should be sterilized and the resulting preparation should be handled aseptically.
Freeze/thaw damage
Antibody를 반복적으로 freeze/thaw 하게 되면, 변성이 일어날 수 있고 binding 능력이 감소하게 됩니다.
-20°C 보관은 대부분의 항체에 적합하고, -80°C 보관의 경우 큰 장점은 없습니다. 냉동고가 성애 방지를 위해 freezing/thawing을 반복하는 기능이 있다면, 이러한 냉동고는 피해야 합니다. 또한 antibody는 냉동고에서도 온도 변화가 가장 적은 위치에 보관하는 것이 좋습니다.
일부 연구자들은 최종 농도의 50%로 cryoprotectant glycerol을 첨가하기도 하며, 이것은 어는 온도를 -20°C 이하로 낮게 하여 많은 항체들에 적용되기도 합니다. abcam의 경우, 소수의 제품만 이러한 조건에서 제품의 안정성이 테스트 되었기 때문에, datasheet 상의 안내대로 보관할 것을 추천하며 guarantee 하고 있습니다. Storage solution에 glycerol이 포함된 경우에도 -80°C 보관을 하게 되면 glycerol 도 얼기 때문에, 추천하지 않습니다. Glycerol은 박테리아 감염 가능성이 있다는 점을 유의하여, glycerol과 같은 cryoprotectant를 첨가할 경우에는 멸균된 조건에서 취급하도록 해야 합니다.
Protein concentration and stability
Antibody를 working concentration으로 희석하고 4°C에 하루이상 보관하는 것은 피해야 합니다. 단백질은 1mg/ml 혹은 그 이상의 고농도로 보관될 때에 degradation이 덜 일어납니다. 이러한 이유로 BSA를 안정제로 사용하기도 합니다. Conjugation 하고자 하는 항체에는 안정화 단백질을 첨가하지 않습니다. 이 단백질이 항체와 경쟁하면서 conjugation 효율을 감소시킬 수 있기 때문입니다
* 출처 : abcam 홈페이지
*학술 문의 : Tel. 031-728-3234, 3237 E-mail. technical@dawinbio.com 카카오톡 플러스친구 ID: abcam
#Abcam#다윈바이오#Antibody#Antibody storage